HiPURE高純度質(zhì)粒小提中量試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
本試劑盒用于高純度質(zhì)粒DNA的小量制備。菌體經(jīng)堿裂解、高鹽、低 pH 處理，質(zhì) 粒可從菌體中釋放出來，并特異、高效地被離心吸附柱吸附。通過清洗液的洗滌可去除 雜質(zhì)，在低鹽、高pH條件下洗脫，得到純度較高的質(zhì)粒 DNA 。使用本試劑盒每次 可處理 1-5 ml 過夜培養(yǎng)的菌液，所得質(zhì)?？芍苯佑糜诿盖?、轉(zhuǎn)化、PCR 、測(cè)序及轉(zhuǎn)染等 各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
它具有下列特點(diǎn)：
1. 快捷、高效：操作簡(jiǎn)便，得率高，節(jié)約時(shí)間。
2. 純度高：沉淀致密，去雜干凈。
成分規(guī)格
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Buffer BL
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25 ml
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50 ml
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100ml
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Buffer S1
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30ml
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60ml
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120ml
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Buffer EB
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10ml
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30ml
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60ml
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Buffer S2
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30ml
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60ml
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120ml
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Buffer S4
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30ml
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60ml
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120ml
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Buffer W1（concentrate）
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13ml
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26ml
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52ml
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Buffer W2（concentrate）
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15ml
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30ml
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60ml
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RNase A (20 mg/ml)
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300μl
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600μl
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1.2ml
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Spin Column with Collection Tubes
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50套
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100套
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200套
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注意：使用前將全部 RNase A 溶液加到 Buffer S1 中混合均勻，2 - 8℃保存;按要求在 Buffer W1 和 W2 中加入無(wú)水乙醇
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本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于其它用途
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保存條件
在室溫(15-25℃)干燥條件下，可保存 12 個(gè)月；更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于 2-8℃ 。若溶 液產(chǎn)生沉淀，應(yīng)在使用前置于 37℃下溶解沉淀。加入 RNase A 后的 Buffer S1 應(yīng)置于 2-8℃ 保存，可穩(wěn)定保存 6 個(gè)月。
使用方法
柱平衡：
向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入400μl 的平衡液BL ，12,000 rpm (-13,400×g ) 離 心 1 min ，棄收集管中濾液，將吸附柱重新放回收集管中。（請(qǐng)使用當(dāng)天處理過的柱子）
1. 取 1-5 ml 過夜培養(yǎng)的菌液，室溫 12,000 rpm 離心 1 min ，盡量將上清去除干凈。
（注 意：根據(jù)菌液的濃度決定取液量，濃度高時(shí)取 1.5 ml 菌液離心即可，濃度低時(shí)可多收集一次）
2. 加入 250 μl Buffer S1 ，旋渦震蕩或用移液器充分吹打使菌體重懸均勻。
（注 意：菌體沉淀一定要懸浮均勻，如有未徹底懸浮的菌塊會(huì)影響裂解，導(dǎo)致提取的質(zhì)粒濃度及純度降低）
3. 加入 250 μl Buffer S2 ，溫和顛倒混勻使菌體完全裂解，直到溶液變成清亮、粘稠。
（注 意：不可劇烈震蕩， 以免造成基因組DNA片段的污染）
4. 加入350μl Buffer S4 ，立即顛倒混勻，可見絮狀沉淀物產(chǎn)生，然后 12,000 rpm 離心 5-10 min，將上清液轉(zhuǎn)移到一干凈的離心管中，加入 500 μl 異丙醇混勻。
（注 意：Buffer S4 加入后應(yīng)立即混勻，避免產(chǎn)生局部沉淀）
5. 小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，12,000 rpm 離心30 sec ，棄收集管中濾液。
6. 向吸附柱中加入 500 μl Buffer W1 ，12,000 rpm 離心 30 sec，棄收集管中濾液。
（注 意：Buffer W1為濃縮液，按要求加入無(wú)水乙醇，用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋以防酒精揮發(fā)）
7. 加入 600 μl Buffer W2，室溫 12,000 rpm 離心 30 sec，棄收集管中濾液。
（注 意：Buffer W2 為濃縮液，按要求加入無(wú)水乙醇，用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋以防酒精揮發(fā)）
8. 加入 500 μl Buffer W2，室溫 12,000 rpm 離心 30 sec，棄收集管中濾液。
9. 干燥。將離心吸附柱于 12,000 rpm 離心 2 min，甩干殘留漂洗液。
（注 意：此步不能省略，否則殘留乙醇會(huì)影響質(zhì)粒的后續(xù)使用）
10. 將吸附柱置于一新的無(wú)菌 1.5 ml 離心管（自備）中，加入 100-300 μl 的洗脫液 Buffer EB，室溫 12,000 rpm 離心 1 min，離心管底溶液即質(zhì)粒 DNA。
（注 意：為增加洗脫效率，可將洗脫液在 60℃預(yù)熱。如需使用去離子水洗脫，可用NaOH 調(diào)整其pH值在7.0 - 8.5之間，為了增加質(zhì)?；厥章?，可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置 2 min，再次離心收集）
注意事項(xiàng)
1. xi菌培養(yǎng)時(shí)間一般為 12-16 小時(shí)，如接種量大則應(yīng)減少培養(yǎng)時(shí)間，過度培養(yǎng)會(huì)降低質(zhì) 粒質(zhì)量甚至導(dǎo)致質(zhì)粒 DNA 突變。
2. 每次使用時(shí)都要注意 Buffer S2 和 S4 是否形成沉淀，如有沉淀 37℃溶解后再用。
3. 質(zhì)粒的產(chǎn)量跟xi菌量、質(zhì)?？截悢?shù)、質(zhì)粒大小和操作規(guī)范程度密切相關(guān)。
