產(chǎn)品中心
產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱:2×Fast HiFi PCR MasterMix(不含染料)

  • 產(chǎn)品型號: 5×1ml
  • 產(chǎn)品廠商:通蔚生物
  • 產(chǎn)品價格:1035
  • 產(chǎn)品庫存:100
  • 產(chǎn)品文檔:
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簡單介紹:
2×Fast HiFi PCR MasterMix(不含染料)本產(chǎn)品包含超快速高保真 Pfu DNA 聚合酶,擴增速度大約是普通Pfu DNA聚合酶的10-20 倍,是 Taq DNA 聚合酶的 2-6 倍,不僅縮短了延伸時間,而且提高了酶的擴增性能,使其能夠在更短的時間里擴增更長的模板。含有 dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR反應增強劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑,濃度為 2×。具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等優(yōu)點,可限度地減少人為誤差。
詳情介紹:
產(chǎn)品特點
本產(chǎn)品包含超快速高保真 Pfu DNA 聚合酶,擴增速度大約是普通Pfu DNA聚合酶的10-20 倍,是 Taq DNA 聚合酶的 2-6 倍,不僅縮短了延伸時間,而且提高了酶的擴增性能,使其能夠在更短的時間里擴增更長的模板。含有 dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR反應增強劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑,濃度為 2×。具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等優(yōu)點,可限度地減少人為誤差。

它具有下列特點:
1. 擴增速度快,5-10s/kb,保真性高;
2. 多次凍融或長期放于 4℃不會影響活性;
3. 應用簡便,減少誤差,降低了對 PCR 條件的要求;
4. 含染料的 MasterMix 產(chǎn)品在 PCR 結束后可以直接上樣電泳。

成分規(guī)格

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

2×Fast HiFi PCR MasterMix(含染料)

1ml/5×1ml

2×Fast HiFi PCR MasterMix(不含染料)

1ml/5×1ml

-20℃可長期保存12個月

本產(chǎn)品僅供科研使用 ,不得用于其它用途


使用方法
注 意:以下舉例為常規(guī)PCR體系和反應條件,實際操作中應根據(jù)模板、引物結構和目的片段大小不同進行相應的調(diào)整和優(yōu)化)
1. PCR體系 
推薦反應體系(25μl)

試劑

用量

模板DNA

1ug

Primer1(10μM)

0.5μl

Primer2(10μM)

0.5μl

2×Taq Plus PCR MasterMix

12.5μl

ddH2O

Up to 25μl

注 意:引物濃度請以終濃度 0.1 - 1.0 uM 作為設定范圍的參考。擴增效率不高的情況下,可提高引物的濃度;發(fā)生非特異性反應時,可降低引物濃度,由此優(yōu)化反應體系)

2. PCR程序

過程

溫度

時間

預變性

94℃

2min

25-35cycles

變性

94℃

10sec

退火

55-65℃

10sec

延伸

72℃

1kb/10sec

延伸

72℃

2min


注 意:    
A:擴增> 5 kb 的產(chǎn)物時,建議使用 95℃ 5 min 預變性處理。
B-1:退火溫度:zui適 Tm 與引物間的平均溫度相近,若引物間 Tm 值偏差較大,zui適Tm用引物的zui低 Tm+1-2℃)。
B-2:退火時間:對于含兼并引物、復雜模板的擴增,建議退火時間延長至30s。c:適合的延伸溫度:68-75℃;推薦的延伸速度:10-15 s/kb;質(zhì)粒等簡單模板:5-10 s/kb;常規(guī)基因組模板:10-15 s/kb;復雜模板、臟模板:15-25 s/kb;略微增加延伸時間(5-10 s/kb)有利于提高低濃度、復雜模板 PCR 的產(chǎn)量,但總延伸時間不超過30s/kb)。
3. 結果檢測
反應結束后取5μl反應產(chǎn)物,加入適量上樣緩沖液(含染料的不用加),然后進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。
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