產品詳情
簡單介紹：
2 × Probe qPCR Mix是專用于探針法實時熒光定量 PCR 的預混體系，包含熱啟動DNA Polymerase、PCR 優(yōu)化的穩(wěn)定劑和增強劑、dNTPs 和 Mg2+，操作簡便，主要用于基因組 DNA 靶序列和 RNA 反轉錄后 cDNA 靶序列檢測，如基因表達分析，拷貝數分析，SNP 基因型分析等，適用于不同類型探針法熒光定量。
詳情介紹：
產品特點
2 × Probe qPCR Mix 是專用于探針法實時熒光定量 PCR 的預混體系，包含熱啟動DNA Polymerase、PCR 優(yōu)化的穩(wěn)定劑和增強劑、dNTPs 和 Mg2+，操作簡便，主要用于基因組 DNA 靶序列和 RNA 反轉錄后 cDNA 靶序列檢測，如基因表達分析，拷貝數分析，SNP 基因型分析等，適用于不同類型探針法熒光定量。
它具有下列特點：
它具有下列特點：
1. 高靈敏度：可以精-確定量低拷貝模板；
2. 高特異性：限度的減少引物二聚體和非特異性產物；
3. 有效性：擴增效率高，CT 值更低。
成份規(guī)格
2×Probe qPCR Mix 1ml / 5×1ml
保存條件
-20℃可保存12個月。
使用方法
使用方法
注 意：
以下舉例為常規(guī)qPCR反應體系和反應程序，實際操作中應根據模板、引物結構和目的片段大小不同進行相應的改進和優(yōu)化）
1. 根據以下表格配置反應體系，總體積為20 μl
|
試劑 |
用量 |
終濃度 |
|
2×Probe qPCR Mix |
10μl |
1× |
|
正義引物 (10μM) |
0.5μl |
0.25μM |
|
反義引物 (10μM) |
0.5μl |
0.25μM |
|
探針(10μM) |
0.5μl |
0.25μM |
|
模板 DNA |
x μl |
／ |
|
ddH2O |
Up to 20μl |
／ |
注 意：
1. 通常引物濃度以0.25 μM 可以得到較好結果，可以在 0.1 ~ 1.0 μM作為設定范圍的參考。
2. 使用的探針濃度，與使用的熒光定量 PCR 儀、探針種類、熒光標記物質種類有關，實際使用時請參照儀器說明書，或各熒光探針的具體使用要求進行濃度的調節(jié)。
3. 通常 DNA 模板的量以 10-100 ng 基因組 DNA 或 1-10 ng cDNA 為參照，因不同物種的模板中含有的目的基因拷貝數不同，可對模板進行梯度稀釋，以確定佳的模板使用量。
2. qPCR 反應程序，兩步法 PCR：
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過程 |
溫度 |
時間 |
|
|
預變性 |
95℃ |
5min |
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35－40cycles |
變性 |
95℃ |
15sec |
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退火/延伸 |
60℃ |
30sec |
|
注 意：
建議采用兩步法 PCR 反應程序，若因使用 Tm 值較低的引物等原因，得不到良好的實驗結果時，可嘗試進行三步法 PCR 擴增，退火溫度請以 55℃ - 65℃的范圍作為設定參考