ELISA實(shí)驗(yàn)加樣時(shí)有氣泡的原因和需要注意的細(xì)節(jié)

ELISA實(shí)驗(yàn)加樣時(shí)通常氣泡都是聚集在酶標(biāo)板的孔周圍，導(dǎo)致孔中液體不能與孔壁有效接觸，使孔內(nèi)反應(yīng)不均一。很多說(shuō)明書、教科書上也都提到，加樣時(shí)要避免出現(xiàn)氣泡，這到底是什么原因呢﹖因?yàn)樵谧鰧?shí)驗(yàn)的過(guò)程中，有時(shí)為了打干凈槍頭里面的液體，很容易產(chǎn)生氣泡，是不是這樣對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)后什么影響?
原因：
1.通常氣泡都是聚集在酶標(biāo)板的孔周圍，導(dǎo)致孔中液體不能與孔壁有效接觸，使孔內(nèi)反應(yīng)不均一。
2.包被時(shí)有氣泡的話，將導(dǎo)致包被不完全實(shí)際包被里下降―–弱陽(yáng)性甚至假陰性。
3.封閉時(shí)有氣泡的話，將導(dǎo)致大里未結(jié)合位點(diǎn)的存在，引起非特異性結(jié)合-–本底增高，假陽(yáng)性。
4.加樣時(shí)有氣泡的話，抗原抗體不能有效的結(jié)合––弱陽(yáng)性甚至假陰性。
5.加二抗時(shí)有氣泡的話，抗原抗體不能有效的結(jié)合––弱陽(yáng)性甚至假陰性（競(jìng)爭(zhēng)法相反-—–一假陽(yáng)性〉。
6.加顯色液時(shí)有氣泡的話-—–顯色不完全。
7.加終止液時(shí)有氣泡的話（1、不能完全終止反應(yīng)2、影響酶標(biāo)儀比色，oD值增高)
8.洗滌時(shí)有氣泡的話，非特異性結(jié)合物不能完全洗去，做無(wú)用功。
注意事項(xiàng)：
精準(zhǔn)的儀器和準(zhǔn)確的操作是保證ELISA結(jié)果準(zhǔn)確關(guān)鍵，怎樣的加樣方式才是正確呢?ELISA實(shí)驗(yàn)中一般有5次加樣，即加標(biāo)本、加檢測(cè)抗體、加酶結(jié)合物和加顯色底物及終止液。
1.實(shí)驗(yàn)室使用的微量加樣器應(yīng)注意保養(yǎng)并定期校正。ELISA比較敏感，每孔加入液體量誤差會(huì)導(dǎo)致結(jié)果讀數(shù)差別，因此避免儀器帶來(lái)誤差。
2.加樣前，溶液充分混勻，垂直懸空加入液體，避免加在孔壁上，不可產(chǎn)生氣泡。3.加樣時(shí)避免液體濺出，如有樣本濺出，應(yīng)用吸水紙輕輕拭干，并做相應(yīng)記錄。4.如果加樣槍漏氣以至于加樣的量不夠，不能用槍吸出再加，做相應(yīng)記錄實(shí)驗(yàn)。5.每次加樣順序一致，尤其底物、終止液順序一致，保證每個(gè)孔顯色時(shí)間相同。