土壤中性磷酸酶(S-NP)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100T/96S
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意 : 正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
土壤磷酸酶是催化土壤有機(jī)磷礦化的酶,其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性,是評(píng)價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo)。磷酸酶活性受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH的顯著影響,根據(jù)適PH范圍,一般把土壤磷酸酶分為中性、酸性和堿性三種類(lèi)型。
測(cè)定原理:
中性環(huán)境中,S-NP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉,通過(guò)測(cè)定酚的生成量即可計(jì)算出NP活性。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺(tái)式離心機(jī)、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。
催化反應(yīng):
稱(chēng)取風(fēng)干混勻土壤約0.1g,加入50μL甲苯(自備),輕搖15min;加400μL試劑一并且搖勻后,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱,開(kāi)始計(jì)時(shí),催化反應(yīng)24h;到時(shí)后迅速加入1mL試劑二充分混勻,以終止酶催化的反應(yīng)。8000g,25℃離心10min,取上清液置于冰上待測(cè)。
顯色反應(yīng):
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到660 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管:取微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板,加入10μL蒸餾水,20μL試劑三,4μL試劑四,充分混勻,顯色后再加蒸餾水166μL,混勻后25℃靜置30min,于660nm測(cè)定吸光度,記為A空白管。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管:取微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板,加入10μL標(biāo)準(zhǔn)液,20μL試劑三,4μL試劑四,充分混勻,顯色后再加蒸餾水166μL,混勻后25℃靜置30 min,于660nm測(cè)定吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測(cè)定管:取微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板,加入10μL上清液,20μL試劑三,4μL試劑四,充分混勻,顯色后再加蒸餾水166μL,混勻后室溫25℃30 min,于660nm測(cè)定吸光度,記為A測(cè)定管。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
