還原糖含量測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意 : 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
還原糖廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。植物體內(nèi)的還原糖主要包括葡萄糖、果糖和麥芽糖等,是常見的單糖和雙糖,其中葡萄糖和果糖不僅是呼吸作用的主要底物,也是進(jìn)一步合成蔗糖、淀粉和纖維素的底物。
測(cè)定原理:
加熱促進(jìn)堿性溶液中3,5-二硝基水楊酸溶液與還原糖生成棕紅色氨基化合物,在540nm有特征吸收峰;在一定的濃度范圍內(nèi),還原糖含量與540nm吸光度成線性關(guān)系,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可求出樣品中還原糖的量。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水。
樣品中還原糖的提取:
1、細(xì)胞的處理:收集或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3S,間隔10S,重復(fù)30次),轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中(防止加熱時(shí)水分散失),80℃水浴中40min并且振蕩8~10次,8000g,25℃離心10min,取上清供測(cè)定用。
2、組織的處理:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一),冰浴勻漿,轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中(防止加熱時(shí)水分散失),80℃水浴中40min并且振蕩8~10次,8000g 吧,25℃離心10min,取上清供測(cè)定用。
3、血清(漿)的處理:按照血清(漿)體積(mL):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議取0.1mL血清(漿)加入1mL試劑一),冰浴勻漿,轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中(防止加熱時(shí)水分散失),80℃水浴中40min并且振蕩8~10次,8000g,25℃離心10min,取上清供測(cè)定用。
按照組織質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL蒸餾水),研磨成勻漿,95℃水浴10分鐘(蓋緊,以防止水分散失),冷卻后,8000g,25℃離心10min,取上清液待測(cè)。
