NAD蘋(píng)果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中 MDH 是 TCA 循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋(píng)果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中 MDH 催化草酰乙酸形成蘋(píng)果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH 在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋(píng)果酸-天-冬氨-酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH 分為 NAD-依賴的 MDH 和 NADP-依賴的MDH,中通常只含有 NAD-MDH,在真核細(xì)胞中,NAD-MDH 分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體中。
測(cè)定原理:
NAD-MDH 催化 NADH 還原草酰乙酸生成蘋(píng)果酸,導(dǎo)致 340nm 處光吸收下降。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)-儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。
樣本測(cè)定的準(zhǔn)備:
1、細(xì)胞或組織樣品的制備:
培養(yǎng)細(xì)胞:先收集或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):試劑一體積(mL)為 1000~2000:1 的比例(建議 2000 萬(wàn)或細(xì)胞加入 1mL 試劑一),超聲波破碎或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。