一步法sgRNA 合成試劑盒
本產(chǎn)品僅供體外研究使用，不得用于臨床診斷
描述：
CRISPR/Cas9 是一種由 RNA 指導(dǎo) Cas 核酸酶對(duì)靶向基因進(jìn)行特定 DNA 修飾的技術(shù)，也是為應(yīng)對(duì)噬菌體和外源質(zhì)粒的攻擊而演化來的一種獲得性免疫防御機(jī)制。此系統(tǒng)的工作原理是通過人工優(yōu)化的具有引導(dǎo)作用的sgRNA(Single Guide RNA)引導(dǎo)核酸酶 Cas9 蛋白在與 sgRNA 配對(duì)的靶位點(diǎn)處剪切雙鏈 DNA，引起 DNA 斷裂，進(jìn)而利用生物體內(nèi)非同源末端修復(fù)機(jī)制或同源重組機(jī)制修復(fù) DNA，導(dǎo)致基因移碼突變、替換或刪除，致使基因功能喪失。sgRNA 的體外合成通常有兩種策略：一種為構(gòu)建含特異性序列的轉(zhuǎn)錄質(zhì)粒，另一種則使用合成的 oligo 退火延伸生成含 T7 轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子的雙鏈 DNA 分子，進(jìn)而再使用 T7 RNA 聚合酶進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄，從而獲得 sgRNA。利用合成的 Oligo直接制備 sgRNA，具有操作簡單快速、可實(shí)現(xiàn)高通量等優(yōu)勢，已經(jīng)成為體外合成 sgRNA 的方案。Cas9 的切割是通過向?qū)?RNA(gRNA)與靶 DNA 形成約 20bp 堿基的配對(duì)，且靶序列的 3’端需要有 PAM 結(jié)構(gòu)(NGG)，再引導(dǎo) Cas9 作用實(shí)現(xiàn)的。本試劑盒可通過一步反應(yīng)獲得高純度、高產(chǎn)量的 sgRNA，僅需要合成一條含有特定靶標(biāo)序列的 Oligo，可在 4h 內(nèi)獲得 30~50μg 的 sgRNA。提供多種規(guī)格，詳情可以咨詢客服訂購。
