二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 分光光度法
測(cè)定規(guī)格: 25管/24樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意 : 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
二磷酸核酮糖羧化酶(EC 4.1.1.39)是植物光合作用中的一個(gè)關(guān)鍵酶,既控制著CO2的固定,同時(shí)又制約著碳素向Calvin循環(huán)和光呼吸循環(huán)分流,其活性的大小直接影響著光合速率。
測(cè)定原理:
在Rubisco的催化下,1分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)與1分子的CO2結(jié)合,產(chǎn)生2分子的3-磷酸甘油酸(PGA),PGA可通過(guò)外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶的作用,產(chǎn)生甘油醛-3-磷酸,并使還原型輔酶I(NADH)氧化。因此,340nm吸光度的變化可計(jì)算還原型輔酶I氧化速率,還原型輔酶I氧化速率可反應(yīng)Rubisco的活性。
需自備的儀器和用品:
可見-紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液一:液體25mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體25mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:30mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入12.5mL試劑一,充分混勻待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入12.5mL試劑一,充分混勻待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;
試劑四:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入1.25 mL試劑一,充分溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;
(注意:試劑二、三、四溶解后,按需分裝-20℃保存。)
