動(dòng)物組織基因組DNA提取試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
本試劑盒適用于動(dòng)物組織等基因組 DNA 的提取。試劑盒采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解體系降解蛋白，結(jié)合硅膠膜特異吸附核酸的原理，可快速純化得到高質(zhì)量的基因組DNA。使用本試劑盒得到的基因組 DNA 無(wú)蛋白、核酸酶污染，可直接進(jìn)行PCR、酶切和雜交等相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
它具有下列特點(diǎn)：
1. 簡(jiǎn)便快速，可快速獲得高純度的基因組 DNA；
2. 重復(fù)性好，產(chǎn)量高；
3. 完全去除污染物和抑制劑，便于下游應(yīng)用。
成分規(guī)格
|
Buffer GTL
|
12ml
|
25ml
|
50ml
|
|
Buffer GL
|
12ml
|
25ml
|
50ml
|
|
Buffer EB
|
10ml
|
10ml
|
30ml
|
|
Buffer W1（concentrate）
|
13ml
|
26ml
|
52ml
|
|
Buffer W2（concentrate）
|
15ml
|
30ml
|
60ml
|
|
Proteinase K
|
1ml
|
2×1ml
|
4×1ml
|
|
Spin Column with Collection Tubes
|
50套
|
100套
|
200套
|
|
蛋白酶 K 于-20℃, 其他組分室溫（15 - 25℃) , 可保存 12 個(gè)月
|
|
本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于其它用途
|
使用方法
自備試劑
無(wú)水乙醇、RNase A（可選）。
（注 意：Buffer W1 和 Buffer W2 為濃縮液，按要求加入無(wú)水乙醇，用后及時(shí)蓋緊，以防乙醇揮發(fā)）
1. 稱取 20 mg 動(dòng)物組織（脾組織用量應(yīng)少 10 mg），先打碎處理為細(xì)胞懸液，然后10,000rpm(-11,200×g)離心 1 min，倒盡上清，加 200 μl Buffer GTL，振蕩至徹底懸浮。如果沒有勻漿儀，也可將組織切成細(xì)小碎塊，加 200 μl Buffer GTL。
（注 意：如果需要去除 RNA，可加入 4 μl RNase A（100 mg/ml）溶液（客戶自備），振蕩15 sec，室溫放置 5 min。）
2. 加入 20 μl Proteinase K 溶液，充分混勻，在 56℃水浴或金屬浴直至組織完全溶解。（注意：不同組織裂解時(shí)間不同，通常需 1 - 3 h 即可完成（鼠尾需要消化過(guò)夜，不會(huì)影響后續(xù)操作。）每小時(shí)顛倒混合樣品 2 - 3 次，用水浴或金屬浴振蕩器也可）
3. 加入 200 μl Buffer GL，充分混勻，70℃水浴或金屬浴處理10 min，期間每隔一段時(shí)間震蕩離心管，溶液變得清亮后短暫離心，以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。
（注 意：Buffer GL 加入時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般 70℃時(shí)會(huì)消失，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)，如溶液未變清亮，說(shuō)明細(xì)胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取的DNA量少或者提取的DNA不純）
4. 加入 200 μl 無(wú)水乙醇，充分震蕩，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，短暫離心以去除管蓋內(nèi)壁水珠。
5. 將所得溶液和絮狀沉淀轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，12,000 rpm 離心30 sec，棄收集管中的濾液。
6. 向吸附柱內(nèi)加入 500 μl Buffer W1，室溫 12,000 rpm 離心30 sec，棄收集管中濾液。（注 意：Buffer W1為濃縮液按要求加入無(wú)水乙醇，用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發(fā)）
7. 向吸附柱內(nèi)加入 600 μl Buffer W2，室溫 12,000 rpm 離心30 sec，棄收集管中濾液。（注 意：Buffer W2為濃縮液，按要求加入無(wú)水乙醇，用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋以防酒精揮發(fā)）
8. 向吸附柱內(nèi)加入 500 μl Buffer W2，室溫 12,000 rpm 離心30 sec，棄收集管中濾液。
9. 干燥。將離心吸附柱于 12,000 rpm 離心 2 min，甩干殘留漂洗液。
（注 意：此步不能省略，否則殘留乙醇會(huì)影響質(zhì)粒的后續(xù)使用）|
10. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的 1.5 ml 塑料離心管（自備）中，加入50 - 100 μl Buffer EB，室溫放置 2 min。12,000 rpm 離心 1 min，離心管底溶液即基因組DNA。
（注 意：為增加洗脫效率，可將洗脫液在 60℃預(yù)熱。如需使用去離子水洗脫，可用NaOH調(diào)整其pH值在 7.0 - 8.5 之間，為了增加基因組 DNA 回收率，可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置2 min，再次離心收集）
注意事項(xiàng)
1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL產(chǎn)生沉淀 ，可在 56℃水浴溶解。
2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 片段小，提取量下降。
3. 所有離心步驟均為臺(tái)式離心機(jī)，室溫下操作。
