產(chǎn)品及特點(diǎn)
本試劑盒適用于從新鮮或冷凍的血漿、血清和無細(xì)胞體液中提取高質(zhì)量的游離DNA，也可以用于提取外泌體攜帶的DNA。獨(dú)特的緩沖液/蛋白酶K體系能迅速裂解游離的DNA和蛋白復(fù)合物，降解蛋白，DNA 吸附于硅基質(zhì)膜上，通過快速的漂洗、離心步驟，去除雜質(zhì)，得到高純度的游離 DNA。本試劑盒操作簡單、快速，所得游離 DNA 不含蛋白、核酸酶和其他雜質(zhì)，可直接用于常規(guī) PCR 和實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
它具有下列特點(diǎn)：
1. 簡便快速：1 小時(shí)內(nèi)可獲得高純度的游離 DNA；
2. an全：無需有機(jī)溶劑抽提，使用an全；
3. 穩(wěn)定：所得 DNA 純度高，重復(fù)性好，方便下游應(yīng)用。
成分規(guī)格
|
Buffer GL
|
12ml
|
25ml
|
50ml
|
|
Buffer W1（concentrate）
|
13ml
|
26ml
|
52ml
|
|
Buffer W2（concentrate）
|
15ml
|
30ml
|
60ml
|
|
Buffer EB
|
10ml
|
10ml
|
30ml
|
|
Proteinase K
|
1ml
|
2×1ml
|
4×1ml
|
|
Spin Column with Collection Tubes
|
50套
|
100套
|
200套
|
|
蛋白酶 K 于-20℃，Buffer DT 于 4℃儲(chǔ)存，其他試劑與物品儲(chǔ)存于室溫（15-25℃）。
|
|
本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于其它用途
|
使用方法
自備試劑無水乙醇。
1. 向離心管（自備）中加入 20 ul Proteinase K。
2. 向離心管中加入 200 ul 血清、血漿或無細(xì)胞體液，再加入200 ul Buffer GL渦旋震蕩充分混勻。
（注 意：為確保樣本有效裂解，加入 Buffer GL 后，需將樣本與 Buffer GL 充分混勻。）
3. 56℃孵育 10 min，短暫離心，將管壁上的溶液收集到管底。
4. 加入 250 ul 無水乙醇，渦旋震蕩 15 sec，室溫放置 5 min，短暫離心，將管壁上的溶液收集到管底。
(注 意：如果環(huán)境溫度超過 25℃，無水乙醇應(yīng)在冰上預(yù)冷后使用)
5. 將一個(gè)吸附柱放入收集管中，將上一步所得溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，10,000rpm離心 1 min，棄收集管中的廢液。
6. 向吸附柱內(nèi)加入 500 ul 的 Buffer W1，室溫 10,000 rpm 離心1 min，棄收集管中廢液。（注意：Buffer W1 中含有乙醇，用后及時(shí)蓋緊，以防乙醇揮發(fā)）
7. 向吸附柱內(nèi)加入500 ul的Buffer W2，室溫10,000 rpm 離心1 min，棄收集管中廢液。
（注 意： Buffer W2 按要求加入無水乙醇，用后及時(shí)蓋緊，以防乙醇揮發(fā)；如需進(jìn)一步提高DNA純度，可重復(fù)步驟 7 一次。）
8. 室溫 12,000 rpm 離心 3 min，甩干殘留液體。
（注 意：此步不能省略，否則殘留乙醇會(huì)影響后續(xù)使用）
9. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的 1.5 ml 塑料離心管（自備）中，小心打開吸附柱的蓋子，室溫放置 2 min，使吸附膜完全變干。加入 20 ~ 50 ul 的洗脫液Buffer EB，室溫放置2 min。10,000 rpm 離心 2 min，離心管底溶液即游離 DNA。
（注 意：為增加洗脫效率，可將洗脫液在60℃預(yù)熱。如需使用去離子水洗脫，可用NaOH調(diào)整其pH值在7.0 ~ 8.5之間，為了增加 DNA 回收率，可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置2min，再次離心收集）
注意事項(xiàng)
1. 實(shí)驗(yàn)前在 Buffer W1 和 Buffer W2 中按標(biāo)簽說明加入無水乙醇；
2. 如緩沖液 Buffer GL、Buffer W1 結(jié)晶或產(chǎn)生沉淀，可在 56℃水浴溶解；
3. 所有離心步驟均為室溫下操作。
