產(chǎn)品中心
產(chǎn)品詳情

  • 產(chǎn)品名稱： 2×Pfu PCR MasterMix(含染料)

  • 產(chǎn)品型號(hào)： 5×1 ml
  • 產(chǎn)品廠商：通蔚生物
  • 產(chǎn)品價(jià)格：563
  • 產(chǎn)品庫(kù)存：103
  • 產(chǎn)品文檔：
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簡(jiǎn)單介紹：
本產(chǎn)品包含 Pfu DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 的增強(qiáng)劑和優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑，濃度為 2 ×。具有快速簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，可限度的減少人為誤差。適用于高保真 PCR、復(fù)雜模板如GC 含量高（>60%），有二級(jí)結(jié)構(gòu)的擴(kuò)增和大規(guī)?；驒z測(cè)。
詳情介紹：

產(chǎn)品特點(diǎn)
本產(chǎn)品包含 Pfu DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 的增強(qiáng)劑和優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑，濃度為 2 ×。具有快速簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，可限度的減少人為誤差。適用于高保真 PCR、復(fù)雜模板如GC 含量高（>60%），有二級(jí)結(jié)構(gòu)的擴(kuò)增和大規(guī)?；驒z測(cè)。

它具有下列特點(diǎn)：
1. 顯著提高 PCR 的特異性和靈敏度；
2. 多次凍融或長(zhǎng)期放于 4℃不會(huì)影響活性；
3. 快速簡(jiǎn)便，大大降低勞動(dòng)強(qiáng)度和取樣誤差，而且加入了高性能的PCR增強(qiáng)劑和優(yōu)化劑，降低了對(duì) PCR 條件的要求；
4. 分含染料和不含染料兩種體系。含染料的 MasterMix 產(chǎn)品在PCR結(jié)束后可以直接電泳，無(wú)需加入上樣緩沖液。

成分規(guī)格

產(chǎn)品名稱

規(guī)格


2×Pfu PCR MasterMix(含染料)

1ml/5×1ml


2×Pfu PCR MasterMix(不含染料)

1ml/5×1ml


-20℃可長(zhǎng)期保存，多次凍融不會(huì)影響活性。如需經(jīng)常使用，可存放于 4℃。

本產(chǎn)品僅供科研使用　，不得用于其它用途


使用方法
（注 意：以下舉例為常規(guī)PCR體系和反應(yīng)條件，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整和優(yōu)化）
1. PCR體系 

推薦反應(yīng)體系(20μl)

試劑

用量

模板ＤＮＡ

＜1ug

Primer1(10μM)

0.5μl

Primer2(10μM)

0.5μl

2×Pfu PCR MasterMix

10μl

ddH2O

Up to 20μl

（注 意：引物濃度請(qǐng)以終濃度 0.1 - 1.0 uM 作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系）



2. PCR程序

過(guò)程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

94℃

2min

25－35cycles

變性

94℃

30sec

退火

55-65℃

30sec

延伸

72℃

60sec/kb

延伸

72℃

5min


注 意：    
A 一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度 Tm 低 5℃，無(wú)法得到理想的擴(kuò)增效率時(shí)，適當(dāng)降低退火溫度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，提高退火溫度，由此優(yōu)化反應(yīng)條件。
B 延伸時(shí)間應(yīng)根據(jù)所擴(kuò)增片段大小設(shè)定，Pfu DNA Polymerase 的擴(kuò)增效率為1 kb/min。
C 可根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，錯(cuò)配機(jī)率會(huì)增加，非特異性背景嚴(yán)重。所以，在保證產(chǎn)物得率的前提下，應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)）
3. 結(jié)果檢測(cè)
反應(yīng)結(jié)束后取5μl反應(yīng)產(chǎn)物，加入適量上樣緩沖液（含染料的不用加），然后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。
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