產(chǎn)品詳情
簡(jiǎn)單介紹：
M-MLV 反轉(zhuǎn)錄酶本產(chǎn)品采用大腸桿菌表達(dá)體系，是經(jīng)過(guò)高度純化的重組酶。該酶的RNA酶H活性很低，具有更高的熱穩(wěn)定性，廣泛應(yīng)用于首鏈 cDNA 的合成，反轉(zhuǎn)錄溫度高達(dá)55°C，特異性和 cDNA 產(chǎn)量明顯提高，長(zhǎng)度明顯大于首、二代反轉(zhuǎn)錄酶。本產(chǎn)品適合于從各種組織中提取的總 RNA 或 mRNA 為模板合成 cDNA 首鏈、實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR、3’-和 5’-RACE 等。
詳情介紹：
產(chǎn)品特點(diǎn)
本產(chǎn)品采用大腸桿菌表達(dá)體系，是經(jīng)過(guò)高度純化的重組酶。該酶的RNA酶H活性很低，具有更高的熱穩(wěn)定性，廣泛應(yīng)用于首鏈 cDNA 的合成，反轉(zhuǎn)錄溫度高達(dá)55°C，特異性和 cDNA 產(chǎn)量明顯提高，長(zhǎng)度明顯大于首、二代反轉(zhuǎn)錄酶。本產(chǎn)品適合于從各種組織中提取的總 RNA 或 mRNA 為模板合成 cDNA 首鏈、實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR、3’-和 5’-RACE 等。
它具有下列特點(diǎn)：
它具有下列特點(diǎn)：
1. 逆轉(zhuǎn)錄效率高，首鏈 cDNA 產(chǎn)量高；
2. 長(zhǎng)可合成 5 kb 的 cDNA 片段；
3. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的模板總 RNA 范圍可以在 10 ng-5 μg 之間。。
成分規(guī)格
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產(chǎn)品組成 |
規(guī)格 |
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M-MLV 反轉(zhuǎn)錄酶(200 U/μl) |
50μl/500μl |
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5×RT Buffer(含 0.25M DTT) |
1ml/5*1ml |
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-20℃，有效期 1 年 |
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本產(chǎn)品僅供科研使用 ，不得用于其它用途 |
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使用方法
（注 意：總反應(yīng)體積為20 μl，總RNA的量為10 ng - 5 μg，若起始RNA的量小于50 ng，則建議加入RNA酶抑制劑RNasin）
1. 將5× RT Buffer和M-MLV 反轉(zhuǎn)錄酶溶解并置于冰上備用，準(zhǔn)備好RNA模板、引物（oligo dT，隨機(jī)引物，或者二者的Primer Mix、或者特異性引物），dNTPMix、DEPC-ddH2O等。
2. 在無(wú) RNase的PCR管中加入引物，總 RNA (10 ng - 5 μg)或mRNA(1 - 500 ng)，4μldNTP (2.5 mM each)，4 μl 5 × RT Buffer，1 μl M-MLV 反轉(zhuǎn)錄酶，補(bǔ)足DEPC-ddH2O至 20 μl。
3. 振蕩混勻，離心數(shù)秒使反應(yīng)液聚集于 PCR 管底部。
4. 42℃保溫 15-60 min。85℃孵育 5min，反應(yīng)結(jié)束后，短暫離心，置于冰上冷卻。
5. 該產(chǎn)物可直接用于二鏈的合成或 RT- PCR 擴(kuò)增反應(yīng)，保存請(qǐng)置于-20℃。