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蛋白質(zhì)的分離純化的注意事項(xiàng)
日期：2024-12-22 11:24
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摘要：1.為了避免蛋白質(zhì)變性，不要對(duì)樣品劇烈攪動(dòng)和反復(fù)凍融。
2.緩沖溶液成分盡量模擬細(xì)胞內(nèi)環(huán)。。
3.為了避免蛋白質(zhì)的氧化，將0.1~1mmol/LDTT（二硫蘇糖醇）(或β-巰基乙醇）加入到緩沖溶液中。
4.為了避免重金屬對(duì)目標(biāo)蛋白的破壞，將1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑加入。
5.為了避免微生物生長(zhǎng)，使用清洗溶液。在純化任何一種蛋白質(zhì)的時(shí)候，均必須時(shí)刻對(duì)它的穩(wěn)定性注意維護(hù)，使它的活性得到保護(hù)，需要牢記如下一些通用的注意事項(xiàng)。
6.盡可能置于冰上或者在冷庫(kù)內(nèi)進(jìn)行操作。
7.蛋白濃度不要太稀。
8.除非是進(jìn)行聚焦層。否則pH需要合適，防止所使用的緩沖溶液pH與pI相同，使蛋白質(zhì)的沉淀得以避免。
9.使用蛋白酶抑制劑，避免蛋白酶對(duì)目標(biāo)蛋白的降解；在純化細(xì)胞中的蛋白質(zhì)時(shí)，將DNA酶加入來(lái)使得DNA降解，避免DNA對(duì)蛋白的污染。
蛋白質(zhì)的分離純化在生物化學(xué)研究應(yīng)用中使用廣泛，是一項(xiàng)重要的操作技術(shù)。 一個(gè)典型的真核細(xì)胞可以包含數(shù)以千計(jì)的不同蛋白質(zhì)，一些含量十分豐富，一些僅含有幾個(gè)拷貝。為了研究某一個(gè)蛋白質(zhì)，必須先將該蛋白質(zhì)從其他蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)分子中純化出來(lái)。那么純化的時(shí)候需要注意的細(xì)節(jié)是哪些呢？
注意事項(xiàng)
1.為了避免蛋白質(zhì)變性，不要對(duì)樣品劇烈攪動(dòng)和反復(fù)凍融。
2.緩沖溶液成分盡量模擬細(xì)胞內(nèi)環(huán)。。
3.為了避免蛋白質(zhì)的氧化，將0.1~1mmol/LDTT（二硫蘇糖醇）(或β-巰基乙醇）加入到緩沖溶液中。
4.為了避免重金屬對(duì)目標(biāo)蛋白的破壞，將1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑加入。
5.為了避免微生物生長(zhǎng)，使用清洗溶液。在純化任何一種蛋白質(zhì)的時(shí)候，均必須時(shí)刻對(duì)它的穩(wěn)定性注意維護(hù)，使它的活性得到保護(hù)，需要牢記如下一些通用的注意事項(xiàng)。
6.盡可能置于冰上或者在冷庫(kù)內(nèi)進(jìn)行操作。
7.蛋白濃度不要太稀。
8.除非是進(jìn)行聚焦層。否則pH需要合適，防止所使用的緩沖溶液pH與pI相同，使蛋白質(zhì)的沉淀得以避免。
9.使用蛋白酶抑制劑，避免蛋白酶對(duì)目標(biāo)蛋白的降解；在純化細(xì)胞中的蛋白質(zhì)時(shí)，將DNA酶加入來(lái)使得DNA降解，避免DNA對(duì)蛋白的污染。
上海通蔚生物科技有限公司擁有自己的實(shí)驗(yàn)室，備有業(yè)的技術(shù)研發(fā)團(tuán)隊(duì)，長(zhǎng)期致力于各種生物試劑，細(xì)胞，血清，ELISA試劑盒的研發(fā)與銷(xiāo)售，實(shí)驗(yàn)提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，并提供精湛的技術(shù)服務(wù)，如果您有實(shí)驗(yàn)上的問(wèn)題歡迎來(lái)咨詢(xún)，為您提供業(yè)的一對(duì)一技術(shù)指導(dǎo)。
注意事項(xiàng)
1.為了避免蛋白質(zhì)變性，不要對(duì)樣品劇烈攪動(dòng)和反復(fù)凍融。
2.緩沖溶液成分盡量模擬細(xì)胞內(nèi)環(huán)。。
3.為了避免蛋白質(zhì)的氧化，將0.1~1mmol/LDTT（二硫蘇糖醇）(或β-巰基乙醇）加入到緩沖溶液中。
4.為了避免重金屬對(duì)目標(biāo)蛋白的破壞，將1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑加入。
5.為了避免微生物生長(zhǎng)，使用清洗溶液。在純化任何一種蛋白質(zhì)的時(shí)候，均必須時(shí)刻對(duì)它的穩(wěn)定性注意維護(hù)，使它的活性得到保護(hù)，需要牢記如下一些通用的注意事項(xiàng)。
6.盡可能置于冰上或者在冷庫(kù)內(nèi)進(jìn)行操作。
7.蛋白濃度不要太稀。
8.除非是進(jìn)行聚焦層。否則pH需要合適，防止所使用的緩沖溶液pH與pI相同，使蛋白質(zhì)的沉淀得以避免。
9.使用蛋白酶抑制劑，避免蛋白酶對(duì)目標(biāo)蛋白的降解；在純化細(xì)胞中的蛋白質(zhì)時(shí)，將DNA酶加入來(lái)使得DNA降解，避免DNA對(duì)蛋白的污染。
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